Набор для транскрипции mMESSAGE mMACHINE™ SP6 AM1340

Наборы mMESSAGE mMACHINE™ предназначены для синтеза in vitro больших количеств кэппированной РНК. Кэппированная РНК имитирует большинство эукариотических мРНК, встречающихся in vivo, поскольку имеет на 5' конце кэп-структуру из 7-метилгуанозина. Реакции набора mMESSAGE mMACHINE™ включают кэп-аналог [m7G(5')ppp(5')G] в сверхвысокопроизводительной реакции транскрипции. Кэп-аналог включается только в качестве первого или 5' терминального G транскрипта, поскольку его структура исключает его включение в любое другое положение в молекуле РНК.Принцип работы наборов mMESSAGE mMACHINE™Наборы mMESSAGE mMACHINE™ имеют упрощенный формат реакции, при котором все четыре рибонуклеотида и кэп-аналог смешиваются в одном растворе. Соотношение кэп-аналог:GTP в этом растворе составляет 4:1, что оптимально для максимального выхода РНК и доли кэппированных транскриптов. Наборы mMESSAGE mMACHINE™ идеально подходят для рутинного синтеза кэппированных РНК для микроинъекции ооцитов, трансляции in vitro, трансфекции и других применений. Высокие выходы достигаются за счет оптимизации условий реакции синтеза РНК в присутствии высоких концентраций нуклеотидов. Кроме того, синтезируемая РНК защищена от деградации загрязняющими рибонуклеазами, которые могут присутствовать при использовании ингибитора РНКазы - компонента ферментной смеси. Использование наборов mMESSAGE mMACHINE™Высокопроизводительная транскрипция кэппированной РНК mMESSAGE mMACHINE™ в 20 мкл реакции при двухчасовой инкубации позволяет получать большие массовые количества кэппированной РНК. Это в 10-50 раз больше, чем в обычных реакциях транскрипции in vitro. Соотношение кэп-аналога и GTP оптимизировано для достижения оптимального компромисса между выходом (15-35 мкг) и долей кэппированных транскриптов (80%). Наборы mMESSAGE mMACHINE™ также содержат раствор LiCl для осаждения, который эффективно отделяет белки и неинкорпорированные нуклеотиды (включая свободный кэп-аналог) от кэппированной РНК, что позволяет повысить эффективность трансляции. Наборы mMESSAGE mMACHINE™ оптимизированы для использования только с полимеразами, входящими в состав набора. Использование другой полимеразы может привести к снижению выхода. Наборы mMESSAGE mMACHINE™ содержат все буферы и реагенты, необходимые для проведения 25 реакций транскрипции. При использовании контрольного шаблона, входящего в комплект (Xenopus elongation factor 1α, pTRI Xef), каждая реакция mMESSAGE mMACHINE™ дает примерно 20-30 мкг РНК при использовании РНК-полимеразы T3 или T7, или около 15-25 мкг РНК при использовании РНК-полимеразы SP6.